Один из важных показателей анализа мочи – желчные пигменты. Уробилиноиды в моче могут свидетельствовать о целом ряде болезней. Такие пигменты образуются, как результат распада гемоглобина и других белков, которые содержат его. Они имеются в желчи и придают ей желтоватую окраску. Наибольшую ценность среди показателей имеет, конечно билирубин и его продукты превращения, которые образовываются под воздействием микрофлоры кишечника. Речь идет о билирубиноидах. Чтобы их обнаружить, мочу следует тщательно проверить.
Желчные пигменты в моче могут свидетельствовать о серьезных заболеваниях
Даже если человек здоров, в его моче всегда могут быть обнаружены уробилиногены, которые после окисления мочой переходят в уробилины. Урина должна простоять сутки на свету, чтобы уробилиноген полностью превратился в уролибин. Именно по этой причине свежую урину исследуют на содержание уробилиногена, а постоявшую – на содержание уробилина.
Уробилиноген в моче не имеет цвета, а вот уробилин – желтоват. Этими свойствами и объясняется тот факт, что урина становится темнее со временем. Данные вещества – производные билирубина, который выделяется с желчью – уробилиноиды. Если сравнить химическое строение уробилиноидов, то очевидно, что оно близко и сходно.
Не обнаруживаются данные вещества в том случае, если билирубин не достиг кишечника. Произойти это может в силу многих заболеваний – закупорки желчевыводящих путей, свищах, гепатите.
При высоком содержании уробилиноидов речь может идти о повышении гемолиза, вирусном гепатите, острых инфекциях, сердечной или сосудистой недостаточности, кровотечениях и так далее.
В том же случае, если уробилиноидов в моче не обнаруживаются, но желтушное состояние – на лицо, скорее всего развивается дистрофия печеночных тканей.
Нормы уробилина
Уробилин в моче у здоровых людей должен содержаться в мизерных нормах. Его настолько мало, что анализы показывают отрицательные результаты. Отсюда ясно, что при нормальном состоянии уробилинов в моче не должно обнаруживаться.
Принцип образования уробилиногена в моче
Однако некоторые состояния организма способны влиять на показатель тестов. Реакции могут быть слабо положительными (обозначаются +), положительными (2+) и резко положительными (3+). Повышенные уробилиновые уровни носят название уробилинурии.
Определять уробилиновые уровни в урине важно, ведь по показателям можно судить о том, как эффективна работа системы мочевыделения. Нормальный цвет мочи – прозрачный или слегка желтоватый. Если же организм страдает дефицитом жидкости, то количества воды в урине становится мешьше, а уробилин становится более концентрированным и урина темнеет. Также на потемнение урины могут оказывать влияние некоторые лекарства, диетические режимы и такое наследственное заболевание, как алкаптонурия.
Повышение уровня уробилина происходит при следующих состояния:
- Нарушенная работа печени. В этом случае орган не может справляться с выводом уробилина.
- Образование уробилина в переизбытке в кишечнике.
- Механическая желтуха. В этом случает уробилин определяют степенями закупорки желчных протоков. При полной закупорке уробилина в моче нет, при неполное – его немного. После того, как препятствие будет устранено, наблюдается уробилинурия из-за того, что в кишечник поступает большое количество билирубина.
Многие специалисты настаивают на том, что уробилиновые показатели не являются точным свидетельством наличия заболевания, а только указывают на его возможность. Чаще всего просто происходит срабатывание механизма по сбрасыванию лишних биошлаков в кишечник. А это – дополнительная нагрузка на почки, которые в этом случае не могут справляться со своей прямой обязанностью.
Причины уробилиногена
Также, как и в случае с уробилинов, уробилиноген в здоровом организме отсутствует в высоких показателях. Но все-таки его следы должны обнаруживаться в урине. Полное отсутствие уробилиногена может указывать на механические закупорки желчных протоков, из-за чего желчь просто не выводится из печени, или же говорить о том, что процессы почечной фильтрации нарушены (это происходит при тяжелых формах гломерулонефритов, токсических поражениях почек и новообразованиях).
Тест-полоски на определение билирубина в моче
Резкое повышение показателей уробилиногена может свидетельствовать о следующих состояниях.
- Нарушенные детоксикационные функции печени. При повреждениях клеток печени и снижении функциональности органа, печень перестает заниматься переработкой производных билирубина. По этой причине происходит накопление уробилиноидов в крови и их вывод мочой. Происходит это при острых вирусных, токсических, лекарственных гепатитах, алкогольной интоксикации, опухолях и циррозах.
- . Оно повышается в том случае, если человек страдает гемолитическими анемиями или желтухами, а также болезнями, во время которых массово разрушаются кровяные эритроциты.
Уробилиноген в моче у ребенка может отсутствовать до трехмесячного возраста. И эти показатели могут считаться абсолютной нормой. Объясняется это тем, что микрофлора кишечника таких маленьких деток еще не сформирована полностью, она не специфична и не способна окислять билирубин в уробилиноген.
Что делать
В первую очередь после проведения анализов и обнаружения уробилиноидов в моче, не стоит паниковать. Не забывайте о том, что такие негативные состояния, как страх и гнев могут еще больше усугубить ситуацию, не лучшим образом сказаться на вашем физическом здоровье и привести к застойным явлениям. А именно застои являются причиной большинства воспалений и болезней.
После того, как получены точные результаты, нужно обязательно пересмотреть свой рацион питания и выбрать подходящий диетический режим, который будет щадящим для вашей печени. Не забывайте и о дневном режиме, помните, что самая большая активность печени приходится на период времени с 21.00 до 3.00, но только в том случае, если вы находитесь в абсолютно спокойном состоянии, то есть – спите. Чтобы привести в порядок работу своего организма, просыпайтесь не позже 7 часов, а ложитесь спать – не позже 22.
Относительно диетического режима стоит добавить следующее. Отдайте предпочтение растительно-молочной диете, она как нельзя лучше наладит работу не только печени, но и других важных органов. А еще, для того, чтобы наладить работу кишечника, рекомендовано пить горькие травы. К ним можно отнести девясил, полынь, бессмертник, расторопшу и пижму. Чтобы приготовить настой, возьмите большую ложку любой из перечисленных травок, залейте ее полулитрами кипящей воды и дайте возможность настояться. Принимать следует по четверти стакана перед едой или после нее. Перед употреблением, подогрейте.
Немаловажное место в вашей жизни должны занять спорт, активный отдых и водные процедуры. Таким образом вы поспособствуете тому, чтобы шлаки лучше выводились организмом не только посредством выделительной системы, но и кожными покровами.
Желчные пигменты в моче позволяют оценить функциональную способность ЖКТ, выявить начальные признаки нарушения органов. У здорового человека насыщенность урины уробилиногеном не превышает 17ммоль/л, а билирубин отсутствует. Изменения концентрации веществ свидетельствует о нарушениях различного происхождения. По характеру увеличения и соотношению субстанций, врач может сказать, на каком уровне произошел сбой.
Что означают желчные пигменты в моче
Желчные пигменты . Вещества способны окрашивать выделения в соответствующий цвет.
В норме билирубин в моче практически отсутствует, не определяется стандартными анализами. Появление данной фракции говорит о билирубинурии и начальных проявлениях гепатобилиарной дисфункции: гепатит, цирроз, опухоль печени. В таких случаях у пациентов урина темнеет, приобретает характерный черно-коричневый цвет пива.
Уробилиноген – трансформировавшийся в кишечнике билирубин, проникает в почки и выводится с мочой. Концентрация вещества небольшая, обеспечивает окрашивание в соломенно-желтый цвет. Субстанция постоянно присутствует в мочевом пузыре, свидетельствует о нормальной работе ЖКТ и выделительной системы. После окисления на воздухе переходит в уробилин, приобретает более темное желтое окрашивание.
Значительное повышение уробилина появляется при увеличении фракций билирубина крови, нарушении обратного всасывания продуктов распада, блоке в кишечнике. Отрицательный тест на уробилин говорит об отсутствии оттока желчи из печени или тяжелом поражении гепатоцитов. Повышение и снижение фракций желчных пигментов неблагоприятные признаки начавшихся нарушений.
Виды
Известны следующие пигменты мочи: билирубин и уробилин. После расщепления гема в крови циркулирует несвязанная фракция билирубина. Данный продукт нерастворим в жидких средах, не проходит через почечный фильтр в мочу. Вещество крайне токсично, нуждается в обезвреживании. После попадания в печень субстрат трансформируется: соединяется с глюкуроновой кислотой, становится гидрофильным, малоопасным. Далее пигмент поступает по желчевыводящим протокам в тонкую кишку. Системой воротной вены небольшая часть билирубина повторно всасывается, а остаток выводится с калом в виде стеркобилина. Порция конъюгированной субстанции попадает в урину в виде уробилиногена, где окисляется и становится уробилином.
Причины появления
В обычном состоянии желчь в моче содержится в минимальных концентрациях, которые могут колебаться в течение суток, но не превышают допустимых пределов. В норме с уриной выделяется только уробилин. Появление связанного растворимого билирубина свидетельствует о патологии. При этом само вещество всегда повышено к крови, значение непрямой фракции может варьировать.
Отсутствие уробилина встречается при воспалении, опухолевой закупорке желчных путей, при нарушении мочеотделения, терминальных поражениях печени.
Видео: Все о билирубине
У взрослых
На практике врачи чаще сталкиваются с нарушениями выведения продуктов распада гема у работоспособного населения. Причины, вызывающие появление билирубина в моче:
- ЖКБ, холестаз;
- инфекции;
- интоксикации, отравления;
- гепатиты, болезнь Боткина;
- цирроз;
- опухоли печеночно-билиарного тракта;
- удаленный желчный пузырь;
- кишечная непроходимость;
- нарушения сердца и сосудов, приводящие к гипоксии паренхимы;
- гипотиреоз.
Уробилин возрастает при следующих состояниях:
- Заболевания паренхимы печени, когда не происходит повторного захвата билирубина и высокие концентрации пигментов остаются в крови, превышают почечный фильтр и обнаруживаются в моче.
- Повышенный гемолиз эритроцитов. Помимо физиологического увеличения в период менструации и периода новорожденности, встречается при малярии, пневмонии, кровотечениях различной локализации, нарушениях свертывающей системы, сепсисе.
- Патологии ЖКТ с усилением всасывания продуктов распада гемоглобина: хронические запоры, непроходимость кишечника.
У детей
Нередко . Явление связанно с физиологической адаптацией: замена фетального гемоглобина, сопровождается повышением распада эритроцитов, возникает желтуха новорожденных. Важно следить за динамикой состояния: быстрое повышение концентрации и появления билирубина в урине свидетельствует о нарушении естественного процесса, появлении патологии.
В раннем возрасте причиной появления пигментов в урине становятся:
- генетические поломки ферментативной трансформации билирубина — Синдром Ротора, Криглера, Дубина –Джонсона;
- нарушения системы крови (геморрагический диатез, болезнь Верльгофа);
- гемолитическая желтуха;
- инвагинация с последующей кишечной непроходимостью.
При беременности
В момент вынашивания плода повышается нагрузка на все органы и системы. Даже у здоровых женщин в моче может определяться увеличение уробилиногена. При этом пациентки жалуются на потемнение урины. В случае, когда имеется патология билиарного аппарата до беременности, возможно усугубление состояния. Дополнительно играют роль усиленная работа сердца и почек, способствующих увеличению ОЦК и концентрации всасываемых веществ.
Контроль уровня желчных пигментов позволяет подсказать наступление обострения. У пациентки в интересном положении необходимо исключить холецистит, вирусный гепатит, пиелонефрит, нарушения свертывающей системы.
Диагностика
Изолированное незначительное потемнение урины обычно не является поводом для беспокойства. Однако при обнаружении следующих признаков необходимо проконсультироваться со специалистом:
- моча темно-коричневого цвета;
- обесцвеченный кал;
- повышение температуры, слабость;
- диспепсические расстройства (тошнота, рвота, нарушения стула)
- кожный зуд;
- нарушение мочеиспускания;
- иктеричность кожи, слизистых;
- боли в правом подреберье;
- появление спонтанных гематом.
Прежде всего, требуется посетить терапевта, для назначения стандартных анализов мочи на выявление желчных пигментов. При обнаружении нарушений врачом определяется вероятная причина состояния. С учетом этого становится ясно, к какому специалисту обратиться за помощью. Болезни крови корректирует гематолог. Гепатиты лечит инфекционист. Нарушения гепатобилиарного тракта – гастроэнтеролог, при необходимости хирург.
Для диагностики назначают:
- Общий анализ крови для установления анемии при повышении распада эритроцитов.
- Биохимия крови позволяет определить концентрацию фракций билирубина, щелочной фосфатазы, белка, составить представление о функционировании печени.
- Гемотест – анализ испражнений на скрытую кровь при подозрении на кровотечение ЖКТ.
- Определение маркеров вирусных гепатитов при заборе крови.
- УЗИ органов брюшной полости.
Основной способ выявления пигментов – качественное исследование различных сред организма (урина, кровь, кал). Проводятся специальные пробы на присутствие уробилиногена: Флоранса, Гмелина, Розина, Богомолова. Для реакций применяют йод, азотную и соляную кислоты, которые соединяясь с компонентами желчи, образуют специфическую окраску. В зависимости от интенсивности полученного оттенка лаборант в заключении указывает тип реакции: от слабо (+) до резко положительной (++++).
Количественно установить желчные пигменты помогают тест-системы с реактивом Эрлиха, метод флуоресценции.
Лечение
Перед началом терапии необходимо достоверно установить причину, появления или увеличения продуктов желчи в крови. Сбор жалоб, анамнеза, результатов диагностических тестов поваляет максимально точно определить тип нарушения.
В основном коррекция нарушений гепатобилиарного тракта производят традиционными способами:
- В обязательном порядке рекомендуется лечебная диета, противопоказан алкоголь и курение.
- Вирусные гепатиты лечат по специальным алгоритмам.
- Проводится дезинтоксикация, плазменное очищение крови.
- Назначают гепатопротекторы, желчегонные средства.
- Применяется поддерживающая (глюкоза, витамины) и иммунностимулирующая терапия.
Оперативному удалению подлежат опухоли, камни и другие механические препятствия. Оптимальный метод подбирается в зависимости от вида вмешательства, неудачи от консервативной терапии.
Нетрадиционные способы лечения допустимы при наличии патологических желчных пигментов в урине. Обычно используют специальные настои трав с гепатопротекторными свойствами или направленными на усиление желчевыделительной функции. Перед началом применения народных способов терапии необходимо проконсультироваться со специалистом, во избежание перекрестных эффектов лекарственного взаимодействия.
Прогноз и профилактика
При своевременной диагностике и лечения патологий, приводящих к нарушению выведения желчных пигментов, прогноз благоприятный, ведет к выздоровлению и устранению нарушений.
Для предотвращения развития патологий билиарного тракта необходимо:
- Соблюдать правила личной гигиены.
- Вести активный здоровый образ жизни, правильно питаться.
- Своевременно лечить заболевания ЖКТ.
- Прививаться от гепатита.
Видео : Как понизить билирубин, разжижить желчь.
Состав и концентрация растворенных в моче веществ отражают ход всех видов обмена. Ненужные продукты метаболизма выделяются из организма с мочой, если размер их молекул позволяет проходить сквозь почечный фильтр. Остальные – направляются в кишечник.
Желчные пигменты в моче присутствуют в очень незначительном количестве. Именно они окрашивают урину в желтоватые цвета. Обычными лабораторными методами выявить этот минимум невозможно, да и не считается необходимым.
В случае потемнения цвета мочи до «оттенка пива» возникает подозрение на рост концентрации желчных пигментов, вызванный их повышенным содержанием в крови. Проведение анализа мочи с качественными и количественными реакциями позволяет правильно поставить диагноз.
Какие пигменты желчи попадают в мочу
В моче обнаруживаются 2 вида желчных пигментов:
- билирубин;
- уробилиноген.
Соответственно подобные состояния могут называться билирубинурией и уробилиногенурией.
Что такое билирубин?
Распад эритроцитов крови вызывает повышенный выход гемоглобина. Именно из него в печени образуется билирубин. Вещество может присутствовать в крови в двух состояниях:
- свободный билирубин (неконъюгированный) – через барьер почечной мембраны не проходит, значит в моче его в норме не бывает, несмотря на повышенный уровень;
- связанный (конъюгированный) – вступает в реакцию с глюкуроновой кислотой, становится растворимым соединением и выводится в мочу, желчь, а с нею в кишечник.
Превращения происходят в печеночных клетках. Билирубинурия обусловлена повышенным содержанием связанного билирубина в крови.
Образование билирубина связано с процессом распада эритроцитов
Как образуется уробилиноген?
Уробилиноген является продуктом последующей переработки билирубина в кишечнике силами:
- ферментов слизистой оболочки;
- бактерий.
Более современные данные указывают на наличие уробилиногеновых тел, к которым относятся производные:
- мезобилирубиноген,
- i-ypoбилиноген,
- уробилиноген IX a,
- d-уробилиноген,
- «третий» уробилиноген.
Два последних типа и стеркобилиноген синтезируются в достаточно малых количествах, значения для диагностики не имеют.
Образование уробилиногена из связанного билирубина происходит в верхней части тонкого и начале толстого кишечника. Некоторые исследователи считают, что он синтезируется клеточными ферментами дегидрогеназами в желчном пузыре при участии бактерий.
Небольшая часть уробилиногена сквозь стенку кишечника всасывается в портальную вену и возвращается в печень, где подвергается полному расщеплению. Другая – перерабатывается в стеркобилиноген.
Далее, через геморроидальные вены, эти вещества могут попасть в общий кровоток, почками выделяются в мочу. Большая часть стеркобилиногена в нижних отделах кишечника трансформируется в стеркобилин и выводится с калом. Это основной пигмент, обеспечивающий окраску испражнений.
Нормальным уровнем в моче считается не более 17 мкмоль/л. Если моча недолго контактирует с воздухом, уробилиноген подвергается окислению кислородом и превращается в уробилин. Это можно проследить по цвету:
- уробилиноген бесцветное вещество, свежая моча имеет соломенно-желтый оттенок;
- через некоторое время из-за образования уробилина она темнеет.
Желтушность новорожденных связана с повышенным распадом эритроцитов и переходом на собственное кроветворение
О чем «говорят» пигменты мочи?
Учитывая биохимические превращения и свойства желчных пигментов, их определение может считаться достоверным признаком поражения печени, неспособности справиться с утилизацией продуктов распада эритроцитов.
При выявлении билирубинурии следует предположить 2 варианта патологии:
- нарушение работы клеток печени (воспаление, потеря количества из-за замены рубцовой тканью, сдавление отеком, расширенными и переполненными желчными ходами), этот процесс подтверждают проверкой содержания в крови аспарагиновой и аланиновой трансаминаз, щелочной фосфатазы, общего белка;
- скопление в крови повышенного содержания гемоглобина из разрушенных эритроцитарных клеток, для уточнения потребуется исследование процесса кроветворения, анализ пунктата костного мозга.
Когда нарушается содержание билирубина в моче?
Неконъюгированный билирубин появляется в крови при заболеваниях печени:
- вирусных гепатитах;
- токсическом гепатите при отравлениях ядовитыми веществами (лекарствами);
- тяжелых последствиях аллергии;
- циррозе;
- кислородной гипоксии печеночной ткани при сердечной недостаточности;
- метастатическом поражении раковыми клетками из других органов.
Но в мочу он не переходит из-за невозможности фильтрации. Только в случае почечно-печеночной недостаточности с разрушением мембраны нефронов его можно обнаружить в урине.
Эти же заболевания сопровождаются накоплением конъюгированного билирубина. По его уровню в крови судят о степени поражения печеночной ткани. «Почечным порогом» для билирубина считается уровень в 0,01-0,02 г/л.
Если функция печени не нарушена, но затрудняется отток желчи в кишечник, то в кровь поступает значительное количество связанного билирубина и соответственно растет его выделение с мочой. Этот вариант патологии развивается при:
- желчекаменной болезни;
- сдавливании желчного протока опухолью головки поджелудочной железы или отечностью при остром панкреатите.
Нарушение оттока желчи приводит у большим цифрам билирубина в урине
Билирубинурия появляется в результате замедленного потока желчи в междольковых протоках (холестаза), просачивания желчи в кровеносные сосуды. У пациента выражается в желтушности кожи и склер. По соотношению в крови и моче свободного – связанного билирубина определяют вид желтухи (механическая или паренхиматозная, подпеченочная или печеночная).
Важным отличительным признаком гемолитических состояний служит отсутствие билирубинурии.
О чем судят по содержанию уробилиногена?
В диагностике имеет значение как повышенный, так и пониженный уровень пигмента в моче. Рост верхнего нормального уровня возможен за счет:
- Поражения паренхимы печени, но сохранения поступления основной массы желчи в кишечник. Возвращенная по воротной вене часть пигмента не перерабатывается клетками гепатоцитами в связи с их функциональной неполноценностью. Поэтому уробилиноген выводится в мочу.
- Активации гемолиза (разрушения эритроцитов) – в кишечнике идет усиленный синтез уробилиногеновых тел и стеркобилина. При этом возвращающаяся часть уробилиногена расщепляется работающей печенью до конечного продукта (пентдиопента), а стеркобилин уходит по геморроидальным венам в общий кровоток, почки и выделяется с мочой.
- Кишечных заболеваний – которые сопровождаются усилением обратного всасывания стеркобилиногена через пораженную стенку (длительные запоры, энтероколиты, хроническая кишечная непроходимость, холангиты).
Механизм гемолиза характерен для таких болезней, как:
- малярия;
- анемия Аддисона-Бирмера;
- крупозная пневмония;
- инфекционный мононуклеоз;
- болезнь Верльгофа;
- некоторые виды геморрагического диатеза;
- сепсис.
Массивный гемолиз вызывается:
- осложнением массивных внутренних кровотечений;
- переливанием несовместимой по группе крови;
- рассасыванием крупных гематом.
Паренхиматозная недостаточность бывает вторичной при расстройствах кровообращения после инфаркта миокарда, развитии сердечной слабости. Лечение цирроза печени методом наложения шунта для устранения портальной гипертензии может осложниться тромбозом почечной вены.
Снижение концентрации уробилиногена указывает на:
- закупорку желчевыводящих путей за счет камня или сдавления опухолью;
- торможение образования желчи вплоть до полного прекращения при тяжелом течении гепатитов, токсическом повреждении печени.
Методы качественного и количественного определения пигментов в моче
Качественные пробы позволяют выявить вещество, но не указывают на его массу. Пробы на билирубин основаны на способности при окислении йодом или азотной кислотой образовывать соединение зеленого цвета (биливердин). В пробирку с 5 мл мочи послойно доливают йодсодержащий раствор (Люголя, йодид калия, спиртовую настойку).
На билирубинурию указывает образование на границе зеленого кольца
Для выявления уробилина из мочи удаляют билирубин, который мешает реакции, раствором кальция хлорида и аммиака, затем проводят различные пробы:
- с сульфатом меди – мочу соединяют с сульфатом меди, затем с раствором хлороформа, после взбалтывания появляется интенсивный розовый цвет;
- с помощью спектроскопа – остается сине-зеленая часть спектра.
В зависимости от интенсивности окраски в заключении могут поставить кресты:
- (+) – реакция слабоположительна;
- (++++) – резкоположительна.
Подробное определение количества желчных пигментов в моче проводится с помощью биохимических реактивов в специальных клиниках. Дело в том, что изучение желчных пигментов более показательно по результатам анализов крови, а не мочи.
Когда необходимо проверить анализ мочи на желчные пигменты?
Качественные тесты на желчные пигменты входят в обязательный перечень стандартного анализа мочи. Поэтому при жалобах пациента на:
- диспепсические расстройства;
- неясные боли в подреберье справа;
- желтушность склер, кожи;
- потемнение мочи и светлую окраску кала;
- необходимо исключить заболевания печени, желчного пузыря.
При выборе метода терапии больного врач не должен повредить органам и системам человека, поэтому анализ нужен для исключения токсического действия лекарственного препарата на печень.
Появление желтухи требует обследования на желчные пигменты
Отравления различными ядовитыми веществами сопровождаются поражением функции почек и печени. По выявлению желчных пигментов ориентировочно можно предположить степень расстройств.
При тяжелых заболеваниях миокарда положительный анализ указывает на вовлечение печеночной ткани в формирование общей гипоксии.
Имеются ли особенности сбора мочи на анализ?
При сборе мочи следует выполнять общие требования:
- обязательная гигиена наружных половых органов;
- для исследования пригодна только средняя порция утренней мочи;
- контейнер с мочой не должен храниться более двух часов, не нужно оставлять прозрачную банку на свету;
- для анализа достаточно 50 мл.
Желчные пигменты мочи участвуют в метаболизме важных органов и системы кроветворения. Их определение в моче играет значительную роль в диагностике.
Желчные пигменты (билирубин, биливердин и др.) образуются при распаде гемоглобина эритроцитов и появляются в моче при желтухах. Моча, содержа щая желчные пигменты, имеет желтовато-коричневое или зеленое окрашивание (характерный признак желтухи).
Проба на билирубин с раствором йода (проба Розина)
К 3 мл мочи осторожно наслоить 1% спиртовый раствор йода или раствор Люголя. При наличии билирубина на границе между обеими жидкостями образуется зеленое кольцо. С нормальной мочой проба отрицатель на.
Проба Гмелина на желчные кислоты
К 1 мл концентрированной азотной кислоты осторожно по стенке насло ить мочу равный объем. При наличии желчных пигментов на границе наслаива ния образуется зеленое кольцо.
8. Проба Петенкофера на желчные кислоты.
Реакция основана на конденсации желчных кислот с оксиметилфурфуро лом, образующимся под влиянием концентрированной серной кислоты из саха розы. Продукт конденсации имеет красно-фиолетовую окраску.
В пробирку поместить 1 мл мочи добавить 5 капель 5% рас твора сахарозы и осторожно по стенке пробирки наслоить 1 мл концентриро ванной серной кислоты. При наличии желчных кислот на границе наслаивания образуется кольцо красно-фиолетового цвета.
9. Проба Яффе на уробилин.
К 2 мл мочи прибавить небольшую порцию раствора хлористого цинка. При встряхивании появляется хлопьевидный осадок, который растворить в концен трированном растворе аммиака (около 1мл). В норме появляется слабо-зеленая флюоресценция, ярко выраженная при патологии.
10. Качественное определение индикана в моче.
Индикан - калиевая или натриевая соль индоксилсерной кислоты - содер жится в нормальной моче в виде следов. Много индикана содержится в моче травоядных животных, а также в моче человека при усиленном гниении белков в кишечни ке, при запорах и непроходимости кишечника.
В пробирку налить 4 мл исследуемой мочи и прибавить при помешивании равный объем серной кислоты. Затем добавить около 1 мл хлороформа, 1 - 2 капли раствора перманганата калия, закрыть пробкой и несколько раз перевернуть, не встряхивая. Пробирку поставить в штатив и наблю дать интенсивность окрашивания хлороформного слоя в синий цвет 13. Решать ситуационные задачи.
Уметь объяснить принцип метода определения и клинико-диагностическое значение некоторых биохимических показателей 1. Разделение белков сыворотки крови методом электрофореза на бумаге и количественное определение белковых фракций.
Разделение и количественное определение белковых
фракций сыворотки крови методом электрофореза на бумаге.
Принцип метода. Электрофорез – это движение заряженных частиц в поле постоянного электрического тока. Скорость перемещения молекул белков в электрическом поле зависит от величин заряда, молекулярной массы, pH , ионной силы раствора.
Белки сыворотки крови помещают на полоску бумаги, смоченную буферным раствором, через которую пропускают постоянный электрический ток. При pH 8,6 белки сыворотки крови заряжаются отрицательно и под воздействием электрического поля перемещаются к аноду.
Сыворотка крови человека содержит различные белки. С помощью электрофореза на бумаге выделяются 5 фракций - альбумины, α1-, α2-, β-, γ-глобулины.
Клинико-диагностическое значение. Многие патологические состояния сопровождаются количественными изменениями соотношения белковых фракций крови – диспротеинемиями. Уменьшение содержания фракции альбуминов характерно для заболеваний печени за счет снижения белок-синтезирующей функции гепатоцитов. Гипоальбуминемия также сопровождает заболевания почек вследствие потери белка с мочой. Увеличение содержания фракций α1- и α2-глобулинов наблюдается при стрессе, наличии воспалительных процессов за счет белков «острой фазы», при коллагенозах и метастазировании злокачественных новообразований. Фракция β-глобулинов растет при гиперлипопротеинемиях. Фракция γ-глобулинов повышается при иммунных реакциях, вызванных вирусными и бактериальными инфекциями. Снижение γ-глобулиновой фракции может иметь место при первичном и вторичном иммунодефиците.
Порядок выполнения работы
1. Устройство прибора для электрофореза. Прибор состоит из выпрямителя, подающего постоянный ток необходимого напряжения, и камеры для электрофореза. Сама камера состоит из 2-х ванн; в одной из них имеется неподвижная перегородка, куда помещается платиновый электрод (+ анод), а в другой находится электрод из нержавеющей стали (- катод). Между ваннами, заполненными соответствующим буфером, имеется соединительный мост, на который помещают полоски специальной фильтровальной бумаги.
2. Проведение электрофореза. Заполнить обе ванны камеры раствором вероналового буфера с pH 8,6. Буферного раствора в ваннах должно быть столько, чтобы он покрывал неподвижную перегородку, но был ниже подвижных перегородок.
Вставить в ванны электроды. Вырезать из фильтровальной бумаги полосы необходимого размера в зависимости от величины камеры (обычно шириной 4-6 см) и простым карандашом отметить место, на которое впоследствии будет наноситься сыворотка (старт). Смочить эти полоски в вероналовом буфере. Вставить в ванны-камеры соединительный мост. Поместить полоски бумаги на сухие пластинки щипцами, погрузив концы полосок в ванны с буфером, и на заранее отмеченные участки бумаги нанести сыворотку по 0,025-0,005 мл на расстоянии 5-6 см от края моста. Нанесение сыворотки производится со стороны катода.
Рисунок 1. Схема камеры для электрофореза белков на бумаге:
1-стабилизатор; 2-камера для электрофореза; 3-буферный раствор; 4-поддерживающий соединительный мост-электрод; 5-фильтровальная бумага для электрофореза.
После нанесения на бумажные полоски сыворотки камера герметично закрывается крышкой. На крышке камеры расположен прижим блокировки, служащий для включения камеры. Присоединенный выпрямитель подает к камере постоянный ток от 2 до 4 мА при постоянном напряжении 110-160В. Электрофорез проводят при градиенте потенциала от 3 до 8 В на 1 см полосы при комнатной температуре. Хорошее разделение происходит за 18-20 часов.
3. Выключение прибора и выявление белковых фракций. Выключают прибор. Снимают камеры и извлекают бумажные полоски из прибора. Затем каждую полоску помещают в сушильный шкаф на 20 минут при температуре 1050С. При этом происходит фиксация белковых фракций на бумаге. Окраску белков проводят раствором бромфенолового-синего в течение 30 минут, затем промывают электрофореграммы 2% раствором уксусной кислоты. Полученные электрофореграммы сушат на воздухе. Белковые фракции окрашиваются в сине-зеленый цвет.
4. Количественное определение белковых фракций. Окрашенные белковые пятна вырезают, краситель элюируют 0,01 н раствором щелочи. Интенсивность окраски каждой фракции определяют колориметрически на ФЭКе.
Количественное определение белковых фракций на электрофореграмме можно установить двумя способами: путем элюирования краски и фотоколориметрирования и денситометрическим методом.
альбумины 55,4-65,9 %
α1-глобулины 3,4-4,7 %
α2-глобулины 5,5-9,5 %
β-гдобулины 8,9-12,6 %
γ-глобулины 13-22,2 %
Денситометрический метод. В специальном аппарате (денситометре) через электрофореграмму пропускают пучок света, поглощение которого зависит от оптической плотности окрашенных белковых пятен. Свет, прошедший через электрофореграмму, улавливается фотоэлементом и превращается в электрический ток, колебания которого фиксируют на бумажном листе в виде кривой, каждый пик кривой соответствует определенной белковой фракции.
Рисунок 2. Электрофореграмма сыворотки человека.
Принцип.
Из желчных пигментов в моче определяют билирубин и уробилин.
Определение билирубина (проба Розина).
Проба Розина основана на превращении билирубина под воздействием окислителей (йода) в биливердин, имеющий зеленый цвет.
Диагностическое значение. В норме билирубин в моче не содержится.
Билирубин появляется в моче при механической (подпеченочной) желтухе (ЖКБ, обтурация общего желчного протока опухолью, увеличенными лимфатическими узлами) и паренхиматозной (печеночной) желтухе (вирусный гепатит, хронический гепатит, цирроз печени).
При гемолитической желтухе билирубин в моче не обнаруживается.
Определение уробилина (проба Флоренса, проба Богомолова).
Наиболее чувствительной качественной реакцией на уробилин в моче является проба Флоренса.
Диагностическое значение. В норме в моче может содержаться небольшое количество уробилина.
В больших количествах уробилин в моче обнаруживается при паренхиматозной (печеночной) и гемолитической желтухах.
Микроскопическое исследование осадка мочи.
Принцип.
Микроскопия должна проводиться не позднее 2 часов после сбора мочи, при низкой плотности (менее 1010) – непосредственно сразу после сбора.
Элементы осадка мочи, видимые под микроскопом, разделяют на неорганизованные (соли) и организованные (клеточные элементы, цилиндры).
Неорганизованный осадок мочи.
Неорганизованный осадок мочи состоит из солей, выпавших в осадок в виде кристаллов или аморфной массы. Характер солей в основном зависит от коллоидного состояния и реакции мочи.
Диагностическое значение. Особого диагностического значения неорганизованный осадок не имеет. Обнаружение в осадке большого количества солей при однократном исследовании не может расцениваться как патологическое явление.
Кристаллы мочевой кислоты и ураты встречаются при почечно-каменной болезни, массивном распаде клеток опухоли, лейкемической ткани, а также при лихорадочных состояниях.
Оксалаты обнаруживаются в норме при растительном рационе питания.
Организованный осадок мочи.
К организованному осадку мочи относятся эпителиальные клетки, лейкоциты, эритроциты и цилиндры.
Диагностическое значение.
Клетки плоского эпителия попадают в мочу из половых путей и частично из мочеиспускательного канала. В норме встречаются единичные (до 5) клетки.
Большое количество их является признаком неправильно собранной мочи - без предшествующего туалета промежности.
При цистите и уретрите выявление клеток плоского эпителия в моче, связано с интенсивным слущиванием слизистой оболочки и сочетается с дизурией.
Поражение тубулярного аппарата почек при нефрите сопровождается появлением клеток почечного эпителия и цилиндров.
лейкоциты (до 5 в поле зрения).
Обнаружение лейкоцитов в осадке мочи выше нормы – лейкоцитурия (до 50 лейкоцитов в поле зрения) или пиурия (более 50 лейкоцитов в поле зрения). Наблюдается лейкоцитурия (пиурия) при воспалительных заболеваниях почек и мочевыводящих путей (пиелонефрит, цистит, уретрит, туберкулез почек).
В норме в препарате мочевого осадка могут выявляться единичные эритроциты (до 3 в поле зрения).
Гематурия - наличие эритроцитов в моче.
Макрогематурия - обнаружение крови при осмотре мочи.
Микрогематурия - эритроциты в моче выявляются только при микроскопии.
Гематурия с преобладанием измененных («выщелоченных») эритроцитов характерна для острого и хронического гломерулонефрита, инфаркта почки, гипернефромы.
Гематурия с преобладанием неизмененных (свежих) эритроцитов характерна для почечнокаменной болезни, злокачественных новообразований, поликистоза.
Мочевые (почечные) цилиндры разделяются на клеточные, зернистые, гиалиновые, восковидные. Место их образования – почечные канальцы. Источник – клеточные элементы, белок мочи.
В норме цилиндры в моче не выявляются, за исключением единичных гиалиновых цилиндров.
Цилиндрурия - пoявлeниe цилиндров в моче наблюдается при почечной патологии, сопровождающейся выделением с мочой белка, эпителия, эритроцитов и лейкоцитов (гломерулонефрит, пиелонефрит, нефротический синдром).
Гиалиновые цилиндры могут обнаруживаться кроме этого у лихорадящих больных, при застойной почке.
Зернистые цилиндры выявляются при тяжелых поражениях почечной паренхимы.
Восковидные цилиндры характерны для нефротического синдрома, амилоидоза почек, когда в моче имеется большое количество белка.
Цилиндры из лейкоцитов, эритроцитов появляются вместе с большим количеством соответствующих клеточных элементов в моче.